EBV特异性抗体联合检测与EBV感染及分期诊断

王菊英

EB病毒(EBV)是传染性单核细胞增多症的病原体,也与伯基特淋巴瘤(BL),鼻烟癌(NPC)和伴性淋巴组织增生症(xLP)密切相关。EBV属于疱疹类病毒家族，是一种人类中广泛传播的病毒。其主要传播途径为经口传播。EBV在口咽上皮细胞内进行复制并从感染的B淋巴细胞中释放病毒颗粒至唾液中。我国20世纪80年代流行病学显示:3-5y儿童中，90%血清学EBV阳性转化。 婴儿期感染EB病毒，不产生症状或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。病毒在体内长期存在，表现为潜伏感染，当机体免疫功能低下时，潜伏的EB病毒活化形成复发感染。青少年和成人原发感染EBV可导致传染性单核细胞增多症(IM)。IM在我国以学龄前及学龄期儿童中较常见。

一、EBV感染的实验室诊断 EBV分离培养困难，一般用血清学方法辅助诊断。国内EBV感染的检测方法有嗜异性抗体凝集试验、酶免、胶体金、间接免疫荧光、荧光定量PCR及化学发光法（CLIA）等。嗜异性抗体凝集试验，主要用于传染性单核细胞增多症的辅助诊断，但只有60-80%病例呈阳性，且少数正常人和血清病病人也含有此抗体，不过正常人和血清病人的抗体经豚鼠肾组织细胞吸收试验，可变为阴性。目前间接免疫荧光法为参考方法，但其存在主观判断、不适合高通量等缺点。CLIA与参考方法的一致性较高，以快速TAT、高灵敏度及特异性等优势逐渐被国内一些大医院所认可。

二、EBV特异性抗体与EBV感染疾病的诊断及分期 人体感染EBV后能诱生抗EBV核抗原（EBNA）抗体，抗早期抗原（EA-lgG）抗体，抗衣壳抗原（VCA-IgM和VCA-lgG）抗体。由于特定时间出现特定抗体，因而通过血清学方法可诊断EBV感染。最初感染EBV的患者血清中可检测到VCA-IgM，之后IgM抗体逐渐减少到无法检出的水平。几乎同时，VCA-lgG抗体逐渐增加。大部分（＞80%）有症状的传染性单核细胞增多症患者初次检查时VCA-IgM和VCA-lgG抗体水平都在近峰值处。VCA-IgM抗体通常在疾病发作后2到3个月后消失，同时lgG抗体可在正常人体内终生存在。大部分的患者短时间内出现EA（D），但是EB病毒核壳抗体IgG （EBNA-IgG）在疾病发作数周或数月才会出现并可持续存在数年直至终生，在有症状的传染性单核细胞增多症患者中，检测EBNA-IgG抗体，同时结合检测VCA-IgM和VCA-lgG抗体可判断出患者处于急性期或是康复期。EBNA-IgG抗体水平的增高预示传染性单核细胞增多症正处于逐步康复期。VCA-lgG抗体水平增高预示患者处于感染的急性期，VCA-IgM抗体水平的增高可以预示患者处于从最初感染到急性期的进程中。同样的，VCA-IgM抗体水平的下降可以预示患者处于从急性期逐步到减弱期的进程中。EBNA-IgG抗体在健康个体的存在预示既往EBV感染；健康个体中存在VCA-lgG抗体预示既往感染EBV或轻度初次感染。通过EBV特异性抗体联合检测，适于临床诊断EBV感染，并更好地区分EBV感染的不同阶段。

在鼻咽癌血清中可测出VCA-lgG抗体达90%左右，病情好转抗体效价不降，因此对鼻咽癌诊断及预后判断有价值。

EBV特异性抗体联合检测的意义

由于宿主与 EBV之间作用及临床表现的复杂性,跟踪EBV抗体组成结构有益于对EBV感染的诊断。并非各个特异性抗体都是顸示疾病状态所必需的,但是跟踪抗体水平具有诊断意义。通过检测EBV抗原产生的不同抗体可判断是否轻微初次感染或持续性EBV感染，鉴别诊断EBV相关疾病。

三、方法学特性及标本类型 本实验室采用先进的化学发光法进行EBV特异性抗体的联合检测。该方法选用合成肽抗原，避免疱疹病毒家族其他成员发生交叉反应；P18合成肽的氨基酸序列为EB病毒特异性的衣壳抗原片段,所设计的EBNA-1多肽不包含甘氨酸-丙氨酸二聚体的重复序列，可避免非特异性自身抗体的干扰。所应用的LIAISONXL自动化分析仪简便、快速。标本类型为血清，空腹静脉采集2-3ml。