BD FACSCantoTMⅡ流式细胞仪简介及应用

作者: 时间:2014-03-21 点击数:

BD FACSCantoTM流式细胞仪简介及应用

式细胞仪(Flow Cytometer)是集光电子物理,光电测量,计算机,细胞荧光化学,单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。流式细胞术就是利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。医学实验中心科研组流式细胞室自1999年在宁夏地区首次引进BD公司FACSCalibur流式细胞仪,到目前为止已有十几载,流式细胞室采用FACSCalibur开展了HLA-B27检测、淋巴细胞亚群检测、骨髓和外周血白血病免疫分型等临床检测,并承担了本院和医科大临床医师、研究生以及外单位科研人员的流式科研检测。虽然FACSCalibur是单激光流式细胞仪,但凭借它领先的技术、稳定耐用和准确的特性,流式室在过去的十几年里为临床发放了无数张准确及时的检测报告,为临床诊断、治疗和监测提供了可靠的实验数据,尤其是白血病免疫分型检测,是宁夏地区唯一一家开展此项目的医院,为宁夏地区的血液系统肿瘤患者带来了方便。科研组流式室与FACSCalibur相伴已走过十几载,目前,它依然在发挥着作用,为临床检测做着贡献。近期,为适应临床检测的需要,流式细胞室又引进了一台全新的流式细胞仪---BD FACSCantoTMⅡ。

BD是由美国的Becton和Dickinson于1897年在纽约创立,总部设在新泽西州。经过一百多年的发展,BD已成为世界上最大的开发、生产和销售医疗设备、医疗系统和试剂的医疗技术公司之一。1973年BD研发了第一台商业化的BD FACS流式细胞仪,给人类带来了一系列的科学发现。30多年后,BD FACSCantoTMⅡ流式细胞仪系统是流式细胞仪技术发展中一个重要的里程碑。FACSCantoTMⅡ系统适用于各种临床及科研应用,它可以对直径0.5~50μm的颗粒做八参数至十参数分析,可用于分析白细胞、红细胞、细胞系、干细胞、血小板和多种微球分析等。多参数分析可以帮助实验室更好地进行细胞亚群及功能研究、白血病免疫分型、可溶性蛋白分析,细胞表面抗原和可溶性蛋白的定量分析。多参数分析还可以减少样本用量,使每个测试样本得到更多的检测结果。现就FACSCantoTMⅡ的优点及应用做一介绍。

一、光路设计

FACSCantoTMⅡ系统配有两根激光光源——蓝色激光(488nm,风冷,20mW固态激光)和红色激光(633nm,17mW氦氖激光)。激光束通过光导纤维到达光束成形棱镜,使两束分开的激光,投影聚焦在流动检测池上,在此,待测颗粒与激光束正交,产生的光信号由流动检测池后面的光胶耦合透镜收集。发射信号穿过流动检测池,照射到光信号检测系统上。检测系统使用了一系列反射镜,把不同的荧光信号引导到相应的检测器上,并使用反射膜,增大光收集效率,使检测器上收集到最大的光信号。

二、液流系统

FACSCantoTMⅡ采用液流车的设计,液流车上装有几个大型桶,包括一个FACSFlowTM鞘液桶,一个废液桶,以及FACSTM清洗液和FACSTM关机液,液流车系统负责仪器操作时的所有液流运行工作,并通过FACSDivaTM软件来控制日常工作程序,如仪器清洗,仪器开启,仪器关闭等,并可自动进行。这样既节省了时间,提高了效率,又减少了操作者每日装载鞘液,倾倒废液的频率。

三、数字化电子系统

数字化电子系统在提高仪器性能的同时也使仪器更易于使用。仪器去除了电子系统死时间,也不需要进行激光间时间延迟的校正,这意味着样本的流速更快,获取速度也更快,而调整时间更短。有了数字化电子系统,荧光间补偿的调整也更简单。

四、系统软件含有多个预设应用的完备系统,可进行复杂的多色分析

FACSCantoTMⅡ系统配备有临床软件(FACSCantoTMClinical自动软件)和科

研软件(FACSDivaTM软件)。FACSCantoTMClinical自动软件操作简便,仪器条件

和荧光补偿可自动调节,可以利用BD FACSTM 7-Color setup beads完成仪器调

节,得到的标准化的仪器条件保证每天检测结果的一致性,自动跟踪和监测仪器

性能。FACSDivaTM软件可在单软件平台上进行多色荧光分析。

五、不断拓展的应用领域

FACSCantoTMⅡ强大的样本检测功能,为科学工作提供了性能卓越的细胞分析工具。它的研究应用领域可包括免疫功能、血小板、凋亡、细胞因子、胞内Ca2+及pH值、药理学、感染性疾病、寄生虫、细菌、病毒、环境科学等等。

1.免疫表型分析:使用单克隆荧光抗体标记细胞表面标志来判断细胞发育阶段是流式技术应用最多的领域。通过相对计数、绝对计数与细胞比率的变化可以监控疾病状态下的免疫状况。

2.绝对计数:特定细胞群体的绝对计数在临床诊断与治疗上具有极大意义,如CD4+细胞绝对计数可辅助HIV监控治疗,而CD34+细胞绝对计数是干细胞移植的重要指标。

3.白血病免疫分型:FACSCantoTMⅡ突破性的多色分析技术可进行白血病和淋巴瘤的免疫分型,以及分析更复杂的白血病表型尤其是微小残留白血病分析。

4.HLA-B27检测:BD的HLA-B27诊断系统可有效帮助临床鉴别强直性脊柱炎等骨关节疾病。其检测灵敏度99%,特异性97.4%,是强直性脊柱炎临床诊断的重要依据。

5.DNA细胞周期和倍体分析:肿瘤细胞的DNA倍体分析是流式技术另一重要应用,临床上可对一些恶性肿瘤进行早期诊断,跟踪随访和早期治疗,大大提高了一些肿瘤的治愈率和生存率。

6.造血干细胞检测:BD干细胞计数系统采用预配试剂精确辨认造血干细胞,大大提高了实验的准确性、线性度和精密度,实验室内及实验室间重复性好,是临床分析造血干细胞及干细胞移植研究的标准化方法。

7.科研研究领域:对于科研型实验室,FACSCantoTMⅡ系统为科学突破提供了更多的机会。高达八色的荧光检测能力,灵活的模块化设计将强大的功能和简易的操作平台融为一体,可进行血小板活化、凋亡分析、多参数树突细胞分析、体液细胞因子检测、胞内蛋白磷酸化检测、特异性抗原刺激胞内细胞因子检测、PMA刺激PBMC检测TH1、微生物分析、调节性T细胞分析等科研研究。

临床检测的准确和效率在临床诊断和监测中非常重要。随着FACSCantoTMⅡ的应用,凭借它高品质的数据和较高的实验效率,科研组流式室将会不断开展新的检测项目,增强实验室的研究实力,提高实验室的性能,更好地服务于临床,为提高宁夏地区人民的健康水平而努力。

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