滋病实验室检测技术与质量保证

刘文淼

滋病检测是指采用实验室方法对人体血液、体液、组织器官、血液衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相关免疫指标检测。传统的，检测HIV感染者体液中病毒抗体的方法，操作方便、最为普遍，但HIV P24抗原和病毒基因的测定，在HIV感染检测中的地位和重要性也日益受到重视。

1.抗体检测

HIV抗体通常是在感染后3～8周能够被检测出来。抗体检测由初筛和确认试验组成，初筛试验呈阳性的必须进行确认试验。

（1）酶联免疫试验（ELISA）ELISA法的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物，酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物，然后加入酶底物，经酶的催化或水解作用，无色底物产生颜色，用酶标仪测定结果。ELISA法是HIV初筛最常用的方法。目前，HIV检测的ELISA法试剂已经发展到了第四代，HⅣ抗原和抗P24的抗体被同时包被到反应板中，可同时检测血清中的HⅣ抗体和P24抗原。

（2）免疫荧光试验（IFA）IFA基本原理为以培养细胞作为载体，用HⅣ感染细胞，该细胞内就会含有HⅣ抗原，将HⅣ感染的淋巴细胞涂于玻片上，固定，制备为抗原片，加入待检血清，待检血清中的抗HⅣ抗体与抗原结合后，再与荧光素标记的抗人Ig结合，在荧光显微镜下可见到细胞内有黄绿色荧光。

（5）化学发光法 化学发光法主要是依据标本中HIV抗体、抗原浓度与化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系发光强度的检测，直接确定抗体、抗原含量。

（4）明胶颗粒凝集试验（PA）PA的基本过程是先将样品稀释，然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒，混匀后保温。当血清中有HⅣ抗体存在时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。此法操作简便，无需特殊仪器设备，适合对少量标本的检测。

（5）免疫印迹试验（WB）WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将分子量不等的HIV蛋白进行分离，再经转移电泳将不同蛋白条带转移于硝酸纤维膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，根据出现条带情况判定结果，就能测出针对不同结构蛋白抗体，如抗gp120、gp41、P24抗体，特异性较高。WB法是目前最常用的HⅣ确认试验

HIV抗体检测结果有两种可能，HIV阳性或HIV阴性。HIV阴性说明人体内检测不到HIV抗体，但不能说没有感染HIV，要看检测时间，在窗口期内，感染者的体内还没有产生HIV抗体，或还没有产生足量的HIV抗体，这时HIV检测是阴性结果，如果在窗口期之后检测的，可以排除感染HIV的可能。

2.抗原检测

一般用ELISA双抗体夹心法检测P24抗原，在HⅣ感染早期尚未出现抗体时，血中就有该抗原存在，由于P24量太少，阳性率通常较低，P24抗原检测率为30-90%，该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊。HIV P24抗原检测可用于HIV抗体不确定或窗口期的辅助诊断，HIV抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断等。

3.核酸检测

HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV检测方法包括逆转录PCR（RT-PCR）、核酸序列扩增（NASBA）、分支DNA杂交（bDNA）以及实时荧光定量PCR技术。HIV核酸定量系统都有其最低检测限，即可以测出的最低拷贝数或国际单位，RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，但不能排除HIV感染；HIV核酸检测阳性，可作为诊断HIV感染的辅助指标，不能单独用于HIV感染的诊断，目前在分析HIV基因亚型和变异等基础研究中应用。

用PCR法检测HⅣ基因，具有快速、高效、敏感和特异等优点，目前该法已被应用于HⅣ感染早期诊断及艾滋病的研究中。

4. HIV病毒分离培养

将病人淋巴细胞与正常人的淋巴细胞共同培养，适当周期培养后测定培养液HIV P24抗原，从而判断病人的淋巴细胞是否受到HIV感染。细胞培养的方法检测HⅣ专一性强，不会出现假阳性，对于确认那些抗原/抗体检测不确定的个体和阳性母亲新生儿是否感染HⅣ有着重要的意义。但是需要有一定数量的感染细胞存在才能培养和分离出病毒来，因而敏感性差、操作时间长、操作复杂，必须在特定的P3实验室中才能进行，且费用较高，不适用于临床。

以上概述了艾滋病实验室常用检测技术，艾滋病检测的最佳检测时间对于艾滋病患者至关重要，因为艾滋病患者，在早期极少出现异常症状，所以常常被忽略。一直到了发现症状时，艾滋病已经发展到了晚期，治疗已经极为不容易了。所以在感染早期，及时的进行艾滋病检测，能帮助患者及早发现艾滋病症状并进行及时的治疗。